ساخت ناقل rnai اختصاصی زیر واحد گاما گلیادین گندم

thesis
abstract

rnai به سرعت جایگاه خود را به عنوان یک ابزار مهندسی ژنتیک معکوس جهت خاموشی بیان ژن های هدف در گیاهان به دست آورده است. توانایی هدف گیری اعضای خانواده چندگانه ژنی توسط یک ژن تراریخت القا کننده rnai از جمله ویژگی این روش به شمار می رود. در حالی که جهش های حاصل از حذف و اضافه شدن قابل بازگشت هستند، غالبیت rnai در خاموشی ژن ها یکی دیگر از ویژگی های آن به شمار می رود. فناوری در حال حاضر جهت القای rnai در گیاهان، برگرفته از کشف خاموشی موثر ژن هدف از طریق بیان یک توالی mrna حاوی توالی تکراری معکوس می باشد. گاما گلیادین ها، از جمله مهمترین زیر واحد های گلوتن می باشند که بالغ بر 12 درصد پروتئین های گندم هگزاپلوئید را به خود اختصاص می دهند. در چندین دسته بندی اختصاصی صورت گرفته، مشاهده گردیده است که اغلب مبتلایان به بیماری سلیاک نسبت به پپتید های گاما گلیادین واکنش نشان می دهند. فناوری rnai می تواند به عنوان یک ابزار موثر جهت دستکاری بیان ژن گاما گلیادین و کاهش هسته های اپیتوپی بیماری سلیاک برگرفته از خانواده چندگانه ژنی گاما گلیادین در گندم معمولی و سایر گونه های نزدیک مرتبط با آن مورد استفاده قرار گیرد. بنابراین، شناسایی و همسانه سازی ناحیه تکرارپذیر domain ii مربوط به ژن گاما گلیادین، اولین گام در جهت ساخت ناقل rnai ژن گاما گلیادین می باشد. فلذا، تمام توالی های مربوط به ژن گاما گلیادین توسط نرم افزار blastn شناسایی شده و از پایگاه genbank موجود در ncbi استخراج گردید. dna کل ژنومی توسط روش ctab از برگ های تازه گیاه گندم استخراج شد. آغازگرهای اختصاصی طراحی گردیده و جهت جداسازی نواحی اختصاصی ژن گاما گلیادین مورد استفاده قرار گرفت. قطعه تکثیر شده توسط واکنش pcr در ژل آگارز 8/0 درصد جداسازی شده و توسط کیت تخلیص از ژل، خالص گردید. قطعه تخلیص شده، در داخل ناقل ptg19-t همسانه سازی شده، سپس به سلول های باکتریایی مستعد e.coli سویه dh5? تراریخت گردید. کلنی های تراریخت، توسط سیستم آبی/ سفید غربال شدند. تخلیص کلنی های سفید مثبت، توسط کلنی pcr انجام گردید. پلاسمید های نوترکیب موجود در کلنی های pcr مثبت توسط روش استخراج پلاسمید لیز قلیایی، استخراج شده و پلاسمیدهای نوترکیب با خلوص بالا توسط شرکت bioneer توالی یابی گردیدند. قطعه توالی یابی شده در یک مقایسه گسترده با سایر توالی های گاما گلیادین مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و توالی اسید آمینه ای آن جهت تعیین نواحی اپیتوپی شناسایی گردید. آغازگرهای اختصاصی برای قطعه کوچک معکوس طراحی شده و پس از تکثیر قطعه معکوس کوچک، پلاسمید های نوترکیب توسط آنزیم های برشی، برش داده شده و قطعه کوچک معکوس در ناقل پلاسمیدی نوترکیب همسانه سازی گردید. در خاتمه، یک ناقل rnai ژن گاما گلیادین گندم محتوی هسته های اپیتوپ بیماری سلیاک ساخته شد.

similar resources

ساخت کاست rnai برای زیر واحد امگا گلیادین در گندم

امگاگلیادین ها 5 تا 10 درصد از پروتئین های آرد گندم را شامل می شوند. مشخصه بارزی که در ژن های امگا گلیادین وجود دارد و می‎ توان بهآن اشاره داشت وجود توالی های تکراری و فاقد اینترون می باشد. حدود 80 درصد از بیماری آنافیلاکسی ورزشی ناشی از گلیادین های گندم می باشد. همچنین گلیادین ها باعث بیماری های سلیاک و اسکلروزیس متعدد نیز می شوند. تنها راه درمان این بیماری ها رژیم غذایی فاقد گلوتن می باشد. بد...

15 صفحه اول

طراحی بیوانفورماتیکی و ساخت ژن کایمر دربردارنده زیر واحد B کلراتوکسین و زیر واحد A پیلی ویبریو کلرا

زمینه و اهداف: وبا بیماری خطرناکی است که توسط ویبریو کلرا ایجاد می‌شود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی Toxin-coregulated pili A (tcpA) و توکسین کلرا مهم‌ترین عوامل بیماری‌زایی ویبریوکلرا می‌باشند. زیر واحد B انتروتوکسین  Cholera toxin subunit B (ctxB)مسئول اتصال سم به سلول یوکاریوتی است و tcpA که برای کلونیزاسیون باکتری ضروری است، ویژگی‌های ایمونوژنیک دارند. پروتئین‌های کایمر دربردارنده اپی توپ و ادجو...

full text

بررسی ارتباط بین زیر واحدهای گلیادین با صفات کیفی دانه در برخی از ارقام گندم نان در شرایط تنش کم‌آبی

به‌منظور بررسی ارتباط بین زیر واحدهای گلیادین با صفات کیفی دانه، تعداد 30 رقم و لاین گندم نان در شرایط تنش کم‌آبی انتهای فصل کشت و بررسی شدند. تنوع پروتئین‌های گلیادین به روش الکتروفورز پلی اکریلامید گرادیان اسیدی (A-PAGE) انجام شد. تعداد باندهای مشاهده شده برای ارقام شامل 1-5 زیر واحد α، 1-5 زیر واحد ß، 3-8 زیر واحد γ و 3-6 زیر واحد ω بود. در بین زیر واحدهای α بالاترین درصد فراوانی به آلل α1 و...

full text

ساخت وکتور پلاسمیدی rnai برای کاهش پروتئین گلوتن گندم

بیماری سلیاک که به آن آنتروپاتی گلوتن نیز گفته می شود در اثر آسیب مخاط روده ی کوچک در طی مصرف گلوتن ایجاد می شود. افراد مبتلا قادر به تحمل پروتئین گلوتن نیستند . گلوتن شامل دو خانواده گلوتنین و گلیادین ها است . گلیادین ها شامل سه نوع آلفا و گاما و امگا هستند .علم بیو تکنولوژی مدرن قادر است مشکلات ناشی از پروتئین های حساسیت زا را حل و به حداقل برساند. از روشهای موثر پیش رو در این خصوص فناوری rna...

ساخت و آنالیز بیان ناقل گیاهی pCaBGi

بیان موقت مبتنی بر تزریق اگروباکتریوم در برگ گیاه روش نسبتاً سریع و قابل اعتمادی برای آنالیز توالی‌های تنظیمی است. به منظور بهره‌گیری از مزایای این تکنیک یک ناقل بیانی مناسب برای انجام آزمون بیان موقت عناصر تنظیمی مبتنی بر تزریق اگروباکتریوم مورد نیاز است. در این مطالعه بمنظور ساخت یک ناقل بیانی گیاهی، جایگاه‌های آنزیمی مناسب از وکتور pBGi به عنوان قطعه در نظر گرفته شد و وکتور pCAMBIA3301 حامل ژ...

full text

بررسی تنوع اللی زیرواحدهای گلوتنین با وزن مولکولی پایین و گلیادین در ژنوتیپ های گندم با استفاده از نشانگرهای اختصاصی

خواص بی نظیر آرد گندم بستگی به پروتئین های ذخیره ای بذر دارند، گلوتن که رابطه مستقیمی با کیفیت خمیر دارد، از سه جزء گلوتنین های با وزن مولکولی بالا، گلوتنین های با وزن مولکولی پایین و گلیادین تشکیل شده است و در حدود 80 درصد پروتئین های ذخیره ای بذر را تشکیل می دهد. تنوع ژنتیکی در سطح دی ان ای برای گلوتنین های با وزن مولکولی پایین و گلیادین ها به دلیل تنوع اللی بالا و همپوشانی آنها با هم هنوز به...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نور - دانشگاه پیام نور استان تهران - دانشکده علوم کشاورزی

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023